如何正確配制豬葡萄球菌PCR陽(yáng)性對(duì)照

結(jié)合此前討論的豬葡萄球菌PCR陽(yáng)性對(duì)照相關(guān)背景，正確配制需嚴(yán)格遵循以下步驟：

?前期準(zhǔn)備?

在獨(dú)立的專用區(qū)域操作，使用無(wú)DNA酶的高壓滅菌離心管、帶濾芯槍頭，提前準(zhǔn)備好試劑盒配套的熒光PCR專用模板稀釋液。

?梯度稀釋操作?

標(biāo)記6個(gè)離心管，各加入45μL稀釋液，取5μL濃度為1×10E8拷貝/μL的原始陽(yáng)性對(duì)照加入首管，震蕩1分鐘得到1×10E7拷貝/μL的工作液，換槍頭依次完成后續(xù)10倍梯度稀釋，得到6個(gè)梯度的陽(yáng)性對(duì)照，全程放冰上待用。

?實(shí)驗(yàn)用工作對(duì)照配制?

取10μL上述1000倍稀釋后的陽(yáng)性對(duì)照，加入對(duì)應(yīng)體積的無(wú)酶水，配制成和待測(cè)樣本起始體積一致的樣品制備陽(yáng)性對(duì)照，即可投入實(shí)驗(yàn)使用。

?關(guān)鍵注意事項(xiàng)?

所有操作全程避免污染樣本和試劑盒其他組分，剩余未用完的稀釋后對(duì)照需分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融。